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華南理工大學王小慧/廣東省心血管病研究所陳寄梅團隊 CEJ:植物纖維素基雙網絡仿生小口徑人工血管
2023-11-21  來源:高分子科技

  目前,小口徑人工血管<6mm的研究與應用面臨諸多挑戰。這些血管常用于心臟病和周圍動脈疾病治療,但因其直徑小,易發生堵塞和血栓。天然血管內膜為一層光滑致密的內皮細胞,中膜為填充在細胞外基質中的平滑肌細胞。現有臨床應用材料,如聚四氟乙烯(PTFE)和聚酯(如Dacron)血管,不能完美模仿天然血管的結構和功能,彈性差導致血小板易沉積,表面疏水導致內皮細胞難以附著,因此血栓形成風險較高。


  近期,華南理工大學王小慧教授、廣東省心血管病研究所陳寄梅主任醫師團隊以天然血管結構和功能為靈感,提出了一種簡便高效的仿生人工血管的制備策略使用植物來源再生纖維素(RC水凝膠作為骨架,模仿天然血管的細胞外基質結構;通過梯度浸漬和光聚合甲基丙烯酸羥乙酯(pHEMA)作為填料,即:高濃度的pHEMARC水凝膠表面形成光滑致密的親水層模擬天然血管內膜,允許內皮細胞黏附生長;低濃度的pHEMA在人工血管內部形成多孔結構模擬天然血管中膜,允許平滑肌細胞浸潤生長,二者形成相互增強的雙網絡結構同時,這種模仿天然血管結構的RC-pHEMA小口徑人工血管(2mm具有與天然血管接近的力學性能該工作制備的仿生人工血管避免了目前臨床應用材料彈性差、表面疏水、結構單一帶來的血栓形成風險。相關研究成果以“Plant cellulose-based biomimetic artificial Small-Diameter vascular materials enabled by gradient Dual-Network entanglement”為題發表在國際期刊《Chemical Engineering Journal》,論文的第一作者為田苗博士和帥建波博士,通訊作者為王小慧教授和陳寄梅主任醫師。該工作為纖維素基仿生小口徑人工血管的制備提供了新的思路。 



【材料制備】


  研究者首先將植物纖維素在離子液體中溶解后通過模具澆筑的方法進行再生,制備了再生纖維素(RC)水凝膠管,然后將水凝膠管浸泡于一定濃度的甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)溶液中并添加交聯劑和光引發劑,最有通過紫外光聚合后水洗制備了再生纖維素-聚甲基丙烯酸羥乙酯(RC-pHEMA)雙網絡水凝膠管。通過控制HEMA濃度、浸泡時間、光聚合時間使聚甲基丙烯酸羥乙酯在纖維素網絡中呈現梯度分布,實現表面光滑致密,內部疏松多孔的仿生結構;同時制備的復合管具有與天然血管相的力學性能和彈性,可縫合、可彎曲。(圖1 


1 RC-pHEMA人工血管的制備和表征。(A)具有仿生結構的RC-pHEMA雙網絡人工血管制備示意圖。(BC)與臨床使用的人工血管在直徑和彈性方面的比較。(D)靈活性和可縫合性展示。


【材料表征】


  研究者首先通過FTIRNMRXRDXPS、分子模擬等表征方法證實了pHEMARC網絡中的分布以及相互作用。(圖2 


2 (A) RC水凝膠管的制備工藝包括溶解、鑄造和再生。(B, C, D, E, F) RC-pHEMA進行結構分析。(B)預聚合物和pHEMA的固態13C NMR測試。(C) RCpHEMARC-pHEMAFTIR光譜。(D) OCRCpHEMARC-pHEMAXRD分析。(E) RC-pHEMA80C-O信號的XPS分析。(F) RC(藍色)pHEMA(綠色)的拉曼成像。(G) RCpHEMA相互作用的分子模擬。(H)基于分子模擬的旋轉半徑測量。


  然后測試了復合材料的力學性能,縫線保留,爆破壓力,水接觸角并通過SEM觀察了材料的內部結構。結果顯示單純RCpHEMA力學性能較差,二者復合后相互增強,力學性能顯著提升并與天然血管類似。SEM觀察證實了pHEMARC網絡中梯度分布,形成了表面光滑致密,內部疏松多孔的仿生天然血管結構。(圖3 


3 (A) RCpHEMA的應力-應變曲線。(B) RC-pHEMA復合水凝膠的應力-應變曲線。(C) RCRC- pHEMA的剪切流變特性。(D) RCpHEMARC-pHEMA雙網絡水凝膠的力學性能比較。(EF) 不同pHEMA含量復合水凝膠縫線保留(E)和爆破壓力(F)比較。(G) RC-pHEMA復合水凝膠與ePTFE水接觸角的比較。(H) RC-pHEMA80人工血管不同區域的SEM圖像,以及與天然血管結構的比較。


【材料體外細胞和血液相容性】


  隨后利用人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)和兔血測試了體外細胞和血液相容性。結果顯示RC-pHEMA無細胞毒性,不會影響細胞的正常增殖、黏附和遷移。RC-pHEMA不會引起溶血,重要的是相比于臨床使用的膨體聚四氟乙烯(ePTFE)人工血管,RC-pHEMA親水的表面可以使纖維蛋白原和血小板黏附量較少,這從源頭上減少了血栓形成。(圖45 


4 (A) RC-pHEMA80人工血管共培養135 dHUVECs的活死細胞熒光染色。 (BF) RC-pHEMA80共培養061224 hHUVECs劃痕寬度變化的顯微圖像(B)和定量分析(F)(C) 共培養135 dHUVECsRC-pHEMA80人工血管表面黏附和增殖的SEM圖像。(D) RC-pHEMA80人工血管共培養135 dHUVECs細胞活力。(E) CCK-8法檢測RC-pHEMA80人工血管與HUVECs共培養135 dHUVECs增殖情況。 


5 (A)不同pHEMA含量的RC-pHEMA人工血管的體外溶血試驗。(B) RC-pHEMA80人工血管的體外PTTPTTT測定。(C, D) RC-pHEMA80人工血管的血漿復鈣曲線(C)和復鈣時間(D)(E)比較RC-pHEMA80ePTFE人工血管對牛血清白蛋白(BSA)和纖維蛋白原(Fib)的吸附。(F) RC-pHEMA80ePTFE人工血管上血小板黏附的SEM圖像。


【材料體內植入】


  最后將RC-pHEMA移植替換兔頸動脈,通過血管超聲發現植入3個月后管腔血流通暢,未見明顯狹窄,病理染色發現管壁內側有內皮細胞生長,管壁外側有新生血管形成,未見明顯炎癥反應。對兔的其他器官(心、肝、腎)進行病理分析顯示RC-pHEMA不會對全身重要臟器產生影響。(圖6 


6 (A) RC-pHEMA80人工血管在體內植入后的即刻超聲圖像。(BC)植入3個月后的超聲圖像(B)和形態學(C)(D)術后3個月人工血管大體(d1d2)、外層(d3d4)、內層(d5d6)H&E染色和Masson染色。(E)移植組與對照組心臟、肝臟、腎臟的H&E染色比較。


  綜上所述,梯度擴散和聚合方案使RC-pHEMA人工血管能夠復制天然血管的微觀結構和機械/界面性能,具有良好的生物相容性和體內植入的通暢性。本研究開發的簡單、高效、可控的策略為纖維素基小口徑人工血管的開發和應用提供了新的可能性,同時也為制備其他仿生材料提供了參考。


  論文信息:Miao Tian1, Jianbo Shuai1, Brandon A. Bishop, Wei Zhang, Jimei Chen*, Xiaohui Wang*. Plant cellulose-based biomimetic artificial Small-Diameter vascular materials enabled by gradient Dual-Network entanglement. Chemical Engineering Journal 476 (2023) 146751. DOI: 10.1016/j.cej.2023.146751.

  https://doi.org/10.1016/j.cej.2023.146751

  下載:Plant cellulose-based biomimetic artificial Small-Diameter vascular materials enabled by gradient Dual-Network entanglement

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(責任編輯:xu)
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