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華南師大黎錦明研究員團(tuán)隊(duì) Nano Lett.:上轉(zhuǎn)換納米基底光控誘導(dǎo)干細(xì)胞粘附及多向分化
2022-09-17  來源:高分子科技

  干細(xì)胞如間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)具有多向分化潛能,可以在一定條件下特異性分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心機(jī)細(xì)胞等多種類型細(xì)胞,治療骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎、阿爾茲海默病及心肌梗塞等多種疾病。目前臨床上使用MSC治療疾病的關(guān)鍵問題是如何有效的體內(nèi)控制誘導(dǎo)其定向分化為某一類型的細(xì)胞,從而可以針對(duì)性的治療某一種疾病,例如分化為軟骨細(xì)胞治療骨關(guān)節(jié)炎。


  鑒于此,華南師范大學(xué)黎錦明研究員團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)構(gòu)建了一種基于上轉(zhuǎn)換納米顆粒的細(xì)胞培養(yǎng)基底,通過近紅外光光照時(shí)間長(zhǎng)短和功率大小不同,調(diào)控MSC在上轉(zhuǎn)換納米基底上的粘附、伸展及多向分化。作者首先合成了Tm摻雜的核殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒(UCNP),隨后在UCNP表面進(jìn)行硅層包裹以便于表面修飾,修飾得到的UCNP@SiO2通過NHS-PEG-MAL linker連接到玻璃板上,最后在UCNP表面修飾RGD細(xì)胞粘附多肽和ONA光響應(yīng)配體得到近紅外光激活的UCNP-substrate。研究表明,在近紅外光的照射下,UCNP-substrate上的UCNP可以將近紅外光轉(zhuǎn)換為紫外光,使得光響應(yīng)配體ONA從細(xì)胞粘附肽RGD末端解離出來,從而恢復(fù)RGD多肽細(xì)胞粘附功能,加入的MSC得以粘附在UCNP-substrate上增值生長(zhǎng),從而實(shí)現(xiàn)體內(nèi)外“光控細(xì)胞特異粘附”。此外,通過調(diào)節(jié)近紅外光功率的大小和照射時(shí)間,可以實(shí)現(xiàn)UCNP-substrate上光響應(yīng)配體ONA解離程度的不同和RGD多肽活化的數(shù)量差異,從而引起MSCUCNP-substrate上生長(zhǎng)伸展?fàn)顟B(tài)的不同:當(dāng)近紅外光功率較小時(shí)(0.5 W/cm2),RGD活化數(shù)量較少,UCNP-substrate對(duì)MSC的拉伸力較弱,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為橢圓,從而傾向于分化為成脂細(xì)胞;當(dāng)近紅外光功率較大時(shí)(2 W/cm2),RGD活化數(shù)量較多,UCNP-substrate對(duì)MSC的拉伸力較強(qiáng),細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為扁平,從而傾向于分化為成骨細(xì)胞,由此實(shí)現(xiàn)了“光控細(xì)胞多向分化”(示意圖)。 


示意圖UCNP-substrate近紅外光控制誘導(dǎo)MSC粘附及多向分化。


  實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,合成的UCNP@SiO2具有較好的納米尺寸和較強(qiáng)的熒光發(fā)射;通過NHS-PEG-MAL linker可以很好的連接到玻璃板上,形成UCNP-substrate;近紅外光照射UCNP-substrate后,光響應(yīng)ONA可以有效的從substrate上解離下來,從而改變UCNP-substrate表面張力(1)。


1. UCNP@SiO2UCNP-substrate的表征和近紅外光照釋放ONA及改變substrate表面張力。


  細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)表明,近紅外光照射UCNP-substrate后,MSC可以有效地粘附在substrate上進(jìn)行生長(zhǎng);MSC粘附在UCNP-substrate上的數(shù)量和近紅外光照射的功率大小及照射時(shí)間相關(guān):照射功率越大,照射時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞粘附的數(shù)量越多(2a);同時(shí)MSC粘附在UCNP-substrate上后,其生長(zhǎng)伸展的形態(tài)亦和近紅外光照功率大小相關(guān):照射功率較小時(shí),細(xì)胞形態(tài)為橢圓形,照射功率較大時(shí),細(xì)胞形態(tài)較為伸展,為扁平狀(2b)。 


2近紅外光控制誘導(dǎo)MSCUCNP-substrate上的粘附(a)及生長(zhǎng)伸展(b)。


  細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)表明,近紅外光可以調(diào)控MSCUCNP-substrate上的多向分化:當(dāng)近紅外光照強(qiáng)度較弱時(shí),光響應(yīng)分子ONAsubstrate上解離的程度較弱,RGD細(xì)胞粘附肽活化的數(shù)量較少,對(duì)生長(zhǎng)在substrate上的MSC拉伸力較弱,細(xì)胞形態(tài)較為橢圓,此時(shí)MSC傾向于分化為成脂細(xì)胞;當(dāng)近紅外光照強(qiáng)度較強(qiáng)時(shí),光響應(yīng)分子ONAsubstrate上解離的程度較大,RGD細(xì)胞粘附肽活化的數(shù)量較多,對(duì)生長(zhǎng)在substrate上的MSC拉伸力較強(qiáng),細(xì)胞形態(tài)較為扁平,此時(shí)MSC傾向于分化為成骨細(xì)胞。RT-PCRALP/OR染色結(jié)果都驗(yàn)證了這一結(jié)果(3)。 


3. RT-PCRa)和ALP/OR染色(b)結(jié)果表明近紅外光可以調(diào)控MSCUCNP-substrate上的多向分化:光照強(qiáng)度較弱時(shí),MSC分化為成脂細(xì)胞;光照強(qiáng)度較強(qiáng)時(shí),MSC分化為成骨細(xì)胞。


  動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,UCNP-substrate可以在近紅外光調(diào)控下,體內(nèi)控制誘導(dǎo)MSCsubstrate上的特異性粘附:光照時(shí)間越長(zhǎng),光照功率越大,細(xì)胞在substrate上的粘附數(shù)量越多(4)。 


4近紅外光體內(nèi)控制誘導(dǎo)MSCUCNP-substrate上的粘附。


  同時(shí),近紅外光亦可體內(nèi)控制誘導(dǎo)MSCUCNP-substrate上的多向分化:光照強(qiáng)度較弱時(shí),體內(nèi)UCNP-substrate上的MSC傾向于分化為成脂細(xì)胞;光照強(qiáng)度較強(qiáng)時(shí),體內(nèi)UCNP-substrate上的MSC傾向于分化為成骨細(xì)胞。植入體內(nèi)的UCNP-substrate取出后進(jìn)行ALP/OR、免疫組化及免疫熒光染色結(jié)果驗(yàn)證了這一點(diǎn)(5)。


5體內(nèi)近紅外光控制誘導(dǎo)MSCUCNP-substrate上的多向分化。


  該工作以Near-Infrared Light-Controlled Activation of Adhesive Peptides Regulates Cell Adhesion and Multidifferentiation in Mesenchymal Stem Cells on an Up-Conversion Substrate”為題發(fā)表在Nano Lett.上(2022, 22, 2293-2302)。華南師范大學(xué)生物光子學(xué)研究院2019級(jí)碩士研究生郭玉嬌為文章第一作者,文章通訊作者為中山大學(xué)腫瘤防治中心楊安力博士和華南師范大學(xué)生物光子學(xué)研究院黎錦明研究員。


  原文鏈接:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.nanolett.1c04534

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