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潘仕榮 王琴梅
(中山大學(xué)附屬一院，廣州，510080，E-mail:gzpanshr@163.net)
聚氨酯是一類廣泛應(yīng)用的醫(yī)用高分子材料，為滿足長(zhǎng)期與血液相接觸的要求，其抗血栓性必須進(jìn)一步提高。水蛭素(hirudin)是具有與凝血酶高度特異性結(jié)合的生物物質(zhì)，用重組DNA技術(shù)制備的重組水蛭素(r-hir)，在臨床上用于抗凝研究。將r-hir共價(jià)結(jié)合到生物材料表面，改善抗血栓性，這是國(guó)外剛起步的工作。本文在聚氨酯表面先接枝牛血清白蛋白，再進(jìn)一步偶聯(lián)r-hir，最后評(píng)價(jià)了抗凝血酶活性。本研究對(duì)改善聚氨酯的抗血栓性能具有重要意義。
本研究采用的聚合物為：①聚碳酸酯聚氨酯（PU）：本實(shí)驗(yàn)室制備，由聚六亞甲基碳酸酯二醇、MDI、乙二胺等合成 ，溶劑為二甲基甲酰胺。②含羧基的聚碳酸酯聚氨酯（PU1）：除擴(kuò)鏈劑用二羥甲基丙酸代替乙二胺外，其他原料同PU。③Chroroflex（簡(jiǎn)稱Chro）:美國(guó)PolyMedica公司，抗凝血性能優(yōu)良的聚碳酸酯聚氨酯。PU與Chro溶液在水平模具上澆注制片，片厚0.5mm。
在PU和Chro表面上先涂復(fù)PU1溶液（CPU和C-Chro）,并用次甲基藍(lán)吸附法測(cè)定表面羧基含量；再用偶聯(lián)劑EDC接枝牛血清白蛋白（CPU-BSA和C-Chro-BSA）,并通過(guò)FT-ATR-IR譜的差減測(cè)定表面BSA接枝量(Fig 2)；最后用偶聯(lián)劑EDC偶聯(lián)125I-rHir（CPU-BSA-125I-rHir和C-Chro-BSA-125I-rHir）,并用放射性同位素測(cè)定表面rHir的偶聯(lián)量，并用部分凝血酶時(shí)間測(cè)定(KPTT)、凝血酶原時(shí)間測(cè)定(PT)、凝血酶時(shí)間測(cè)定(TT)等試驗(yàn)評(píng)價(jià)樣品的抗凝血酶活性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CPU和C-Chro表面羧基含量分別為0.377和0303μmol/cm2，CPU-BSA和C-Chro-BSA表面BSA含量分別為42.6和26.2μg /cm2，CPU-BSA-125I-rHir和C-Chro-BSA-125I-rHir表面rHir含量分別為71.67和69.11 ng/cm2，比對(duì)照樣品都有很大的提高。抗凝血酶試驗(yàn)評(píng)價(jià)表明，rHir偶聯(lián)樣品的KPTT、PT、TT時(shí)間都明顯延長(zhǎng)，它們的抗凝血酶活性確有提高，抗血栓性能得到有效的改善。
參考文獻(xiàn)
1 Mattuew DP, Michael S, Scott AB et al, Covalent linkage of recombinant hirudin to a novel poly(carbonate) urethanes polymer with protein binding sites:determination of surface antithrombin activity, Artificial Organes,1998,22(8):657-665
2 Yoshihiro Ito, Masahiko S,Yukio I, Synthesis and antithrombogenicity of anionic polyurethanes and heparin-bound polyurethanes, J Bimed Mater Res, 1986,20(8):1157-1177
致謝
本工作得到國(guó)家自然科學(xué)基金 (30070223)資助。 |
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